高效液相色谱法测定通塞脉微丸中绿原酸、甘草素、肉桂酸和甘草酸单铵盐的含量


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高效液相色谱法测定通塞脉微丸中绿原酸、甘草素、肉桂酸和甘草酸单铵盐的含量

高效液相色谱法测定通塞脉微丸中绿原酸、甘草素、肉桂酸和甘草酸单铵盐的含量

品

　　11仪器

　　Agilent 1100LCDAD系统，含在线真空脱气机、低压四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二级管阵列检测器(DAD)、HPChemstation色谱工作站。AG285型十万分之一电子天平(METTLER TOLEDO)。

　　12试剂与药品

　　甲醇为色谱级(美国TEDIA试剂公司);磷酸为AR级(上海佳泰化工有限公司);对照品绿原酸(批号：110753200212)、肉桂酸(批号：07869801)由中国药品生物制品检定所提供。甘草素、甘草酸单铵盐(自制)，经紫外吸收光谱(UV)、红外吸收光谱(IR)、质谱(MS)、核磁共振谱(NMR)等结构测定，高效液相色谱(HPLC)法检测为单一成分，纯度均在99%以上。通塞脉微丸由南京中医药大学中医药研究院制备，批号：031006、031016、031025。

　　2方法与结果

　　21色谱条件[2-3]

　　色谱柱为Zorbax 80A ExtendC18柱(250 mm×46 mm，5 μm)，柱温30℃，流动相为乙腈—体积分数01%磷酸，梯度洗脱，流速为10 min，测定波长λs=276 nm, 参比波长λR=590 nm。梯度洗脱表见表1。

　　22系统适用性试验

　　取供试品溶液5 μL，高效液相色谱仪测试，绿原酸、甘草素、肉桂酸、甘草酸单铵盐的保留时间分别为158、502、535、603 min。理论塔板数按绿原酸计算不低于5 000，4个成分与相邻色谱峰的分离度均大于15。表1梯度洗脱表

　　23对照品溶液的制备

　　精密称取绿原酸、甘草素、肉桂酸、甘草酸单铵盐对照品各适量，置50 mL 量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得含绿原酸32120 μg/mL、甘草素16128 μg/mL、肉桂酸7104 μg/mL、甘草酸单铵盐2 11200 μg/mL的混合对照品溶液B1。

　　24供试品溶液的制备

　　取装量差异项下的通塞脉微丸内容物，混匀，研细，取05 mg，精密称定，置于50 mL容

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