乳腺癌耐药蛋白基因在乳腺癌中的表达及其与化疗疗效的关系


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乳腺癌耐药蛋白基因在乳腺癌中的表达及其与化疗疗效的关系

乳腺癌耐药蛋白基因在乳腺癌中的表达及其与化疗疗效的关系

)。按照世界卫生组织(WHO)乳腺肿瘤组织学类型分类标准:浸润性导管癌53例，浸润性小叶癌3例，黏液腺癌3例，髓样癌1例。

　　12试剂Trizol试剂(Invitrogen公司)，TaKaRs RNA PCR Kit(AMV)Ver30试剂盒(大连宝生物有限公司)，DEPC(大连宝生物有限公司)。引物光探针合成(上海生工公司)：BCRP上游引物序列为5TTAGGATTGAAGCCAAAGG3’,下游引物序列为5TAGGCAATTGTGAGGAAAATA3’;βactin上游引物序列为5CTCGCGC TACTCTCTCTTTC3’，下游引物序列为5CATGTCTCGATCCCACTTAAC3’。

　　13药物疗效判断标准根据化疗前BCRP基因表达情况，将60例患者分为阳性组及阴性组，并采用CEF方案[环磷酰胺05 g/m2 ,第1天(d1)+法玛新80 mg/m2 ,d1+5氟脲嘧啶05 g/m2 ,d1]。21d为1个疗程，3个疗程后，按WHO实体瘤的近期疗效标准评定疗效，分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病稳定(SD)、进展(PD)。

　　14乳腺癌耐药基因的检测采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RTPCR)的方法。

　　141RNA提取肿瘤组织总RNA提取采用异硫氰酸胍、酚、氯仿抽提“一步法”[1]。紫外光分光光度计准确定量，沉淀于无RNAase水中，-80℃保存备用。

　　142cDNA合成按One step RTPCR 试剂盒(日本Takara 公司) 说明书配制RTPCR 反应体系10μL, 含总RNA 1μg、MgCl2 2μL、10倍RT buffer 1μL、dNTP液体 1μL、RNase抑制酶 025μL、OligoDT 05μL、AMV酶 05μL、加入DEPC处理水至10μL，30℃、10min，42℃、30min，99℃、5min，5℃、5min。

　　143PCR反应RT产物10μL，5倍PCR buffer 10μL，Ex taq酶 025μL，BCRP上、下游引物1μL(125pmol)，βactin上、下游引物1μL(125pmol)，灭菌蒸馏水277

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