从图1可见，未经处理的样本蛋白点虽然很多(1 920点)，但分辨率很差。丙酮，TCA-丙酮，Cleaning-up 试剂盒沉淀后的样本与原始样本相比均有很多改善，但TCA-丙酮丢失的蛋白较多(1 644点)，丙酮(1 856点)，和Cleaning-up(1 713点)丢失的蛋白较少。图 1B中，经TCA-丙酮沉淀后，酸性蛋白大量丢失。图1C中，丙酮沉淀蛋白点数多且清楚，无明显拖带和条纹，背景干净清晰，说明蛋白质富集和纯化的效果都比较好。

　　2.2 不同聚焦条件对电泳结果的影响

　　图2中，A聚焦电压是80 kV，B聚焦电压140 kV。由于聚焦时电流较高，将500 V延长2 h，1 kV延长了1 h，从图中可见B的聚焦效果比A有很大改善。图C是我们监测的延长低压聚焦后(图B)的IEF电压走势图，从图中可见电压升至设定的80 kV进行聚焦。图2 B蛋白点数较A明显增多，特别是酸性端，说明B聚焦效果明显好于A。

　　2.3 主动水化与被动水化上样的电泳结果

　　从图3中可看出，图A中的蛋白点数明显增多，点也更圆 ，而且没有图B中的横条纹。说明主动水化比被动水化的聚焦效果更好。

　　3 讨 论

　　双向凝胶电泳(2-DE)由于其在展示全部蛋白质表达改变并鉴定特异性蛋白方面的优势，成为目前蛋白质组学研究首选的分离技术[4]，近年来得到了较大的发展与改善，但实验结果的重复性和稳定性仍有待提高[5]。我国关于肝癌的蛋白质组学研究越来越多，由于肝癌组织成分复杂，干扰成分多，个体差异大使其双向电泳实验条件难以严格控制[6]，目前尚没有针对该组织的双向电泳技术的方法学的系统报道，为此，我们对肝癌组织蛋白的制备、一向聚焦程序、上样方法等关键步骤进行研究对比，优化总结出一套可行的，重复性好的双向电泳方法，供大家参考。

　　3.1 样品制备

　　蛋白质样品的制备是的关键环节，关系到蛋白质组研究结果的准确性[7]。样本制备主要包括蛋白提取与沉淀两个步骤。蛋白提取过程需尽可能地溶解和解聚蛋白质[8]。通常采用分级提取蛋白的方法，但是繁琐的样品制备步骤容易造成

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