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海亚荣生化仪器厂)；KQ-250型超声波提取仪(昆山市超声仪器有限公司)；SartoriusBS210S电子天平(北京塞多利斯天平有限公司)；SHZ-C型循环水式多用真空泵(巩义市英欲予华仪器厂)；722型光栅分光光度计(上海精密科学仪器厂)；电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)；DHG-9123A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。沙枣,产地为新疆。纤维素酶(Cellulase,15 U/mg)、果胶酶(pectic enzyme,25 U/mg),由华美生物工程公司提供。苯酚、浓硫酸、无水乙醇等均为分析纯。
2 方法
2.1 沙枣多糖的测定
测定方法采用苯酚-硫酸法。准确称取标准葡萄糖20 mg于500 mL容量瓶中,加水至刻度。分别取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL,各以水补至2.0 mL,然后加入6%苯酚1.0 mL及浓硫酸5.0 mL,摇匀,静置10 min,室温放置20 min后于490 nm波长处测吸光值(OD),以2.0 mL水按同样显色作为空白,横坐标为多糖含量(μg),纵坐标为光密度值,制作标准曲线。提取液准确稀释一定倍数,吸取1.0 mL(相当于10 μg左右的多糖),按上述步骤操作,测光密度,以标准曲线即可计算样品中多糖含量。然后计算出沙枣多糖提取率。
2.2 复合酶辅助超声波提取沙枣多糖的工艺路线
去核沙枣→粉碎→水浸→复合酶水解→灭酶→抽滤去杂→超声波处理→离心→旋转蒸发仪浓缩→醇沉→真空干燥→沙枣多糖。
2.3 复合酶辅助超声波提取沙枣多糖的操作要点
2.3.1 复合酶提取沙枣多糖
取去核沙枣于50 ℃鼓风干燥箱干燥24 h,过40目筛,得沙枣渣粉待用。取干燥后的沙枣渣粉与蒸馏水混合,分别在不同条件下进行恒温酶解,根据单因素试验的结果及其他植物多糖提取积累的经验,选取纤维素酶和果胶酶的不同加酶量、酶解时间、酶解温度为考察因素,各取3个水平,进行L9(34)正交试验设计,不考虑各因素间的相互影响。 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页 |
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