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针刺对乳腺增生模型大鼠雌激素、雌激素受体及其信号传导的干预作用           
针刺对乳腺增生模型大鼠雌激素、雌激素受体及其信号传导的干预作用

【摘要】  【目的】观察针刺对雌激素介导的乳腺增生模型大鼠的影响。【方法】选用SD雌性未孕大鼠,随机分为4组:正常组、模型组、针刺组(电针膻中、三阴交穴)、西药组(灌胃三苯氧胺05mg·kg-1·d-1);除正常组外,其他组均采用肌注己烯雌酚(剂量为05mg·kg-1·d-1)及黄体酮(剂量为4mg·kg-1·d-1)方法复制乳腺增生模型;造模成功后针刺组及西药组治疗30d,采集标本,检测各组大鼠体质量,第2对乳头高度,血清雌激素(E2)水平,雌激素受体(ER)、细胞外信号调节激酶(ERK)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达及乳腺组织形态学变化。【结果】各组大鼠治疗前后体质量、治疗前乳头高度差异无显著性意义(均P>005),治疗后模型组乳头高度显著增加(P﹤001),各治疗组可显著降低乳头高度(均P﹤005);模型组出现明显乳腺增生形态学改变,各治疗组可显著减少乳腺小叶腺泡数、腺泡腔直径及导管直径(均P﹤005或P﹤001);模型组大鼠血清E2水平,乳腺组织ER、ERK、eNOS蛋白表达阳性细胞数显著增加(均P﹤001),各治疗组可显著降低上述指标(P﹤005或P﹤001)。【结论】针刺治疗乳腺增生的作用可能与其能调节雌激素信号转导通路,抑制雌激素的促乳腺增生效应有关。

【关键词】  乳腺增生/针灸疗法; 雌激素/血液; 乳腺/病理学; 信号转导通路; 疾病模型,动物; 大鼠

雌激素作为一种重要的女性激素,在乳腺的生理病理过程中有着十分重要的作用。乳腺增生具有明显的雌激素依赖性。雌激素能刺激乳腺组织增生,引起乳腺导管扩张和囊肿形成,是影响乳腺增生发生、发展及转归的重要因素[1-2]。雌激素通过靶组织中的雌激素受体发挥其生物学效应,在这一过程中雌激素信号转导机制起着关键性的作用[3]。本实验观察了针刺对雌激素介导的乳腺增生模型大鼠雌激素(E2)水平,雌激素受体(ER)、细胞外信号调节激酶(ERK)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。现报道如下。

  1 材料与方法

  11  实验动物 选用清洁级SD雌性未孕健康大鼠40只,体质量220~240g,鼠龄3个月,由广州中医药大学实验动物中心提供,实验动物使用许可证号:SCXK(粤)20030001。饲养环境:广州中医药大学实验动物中心提供的清洁级动物实验房,动物实验设施使用编号:0005042。

  12 药物和试剂与仪器 己烯雌酚注射液(广州明兴制药厂生产,批号:103149);黄体酮注射液(上海通用药业股份有限公司生产,批号:H31021401);三苯氧胺(TAM,上海华联制药有限公司生产,批号:H10910072);苏木素(广州化学试剂厂生产,批号:20050918);伊红(南京化学试剂厂生产,批号:20051809);E2试剂盒由北京东雅生物技术有限公司提供(批号:20050625),检测仪器为上海日环仪器一厂SN695B型放免测量仪;ER、ERK、eNOS抗体及免疫组化试剂盒购自中山生物试剂有限公司广州分公司,ER、ERK、eNOS一抗工作浓度为1∶100;二抗、三抗、联苯二胺(DAB)工作液购自武汉博士德公司;日本Olympus显微镜;北京航空航天大学图像分析软件(24版本)。

  13 造模方法[4]  大鼠大腿内侧肌注己烯雌酚注射液 05mg·kg-1·d-1,连续25d,继而改用肌注黄体酮4mg·kg-1·d-1,连续5d。

  14 分组 40只大鼠随机选取10只作为正常组,其他30只造模成功后随机分为模型组、针刺组和西药组。正常组在实验的后半段以蒸馏水灌胃2mL/d;模型组造模成功后以蒸馏水灌胃,针刺组造模成功后进行针刺治疗,西药组造模成功后灌胃三苯氧胺 05mg·kg-1·d-1,均30d。

  15 针刺方法 取穴:膻中、三阴交穴。参照《实验针灸学》[5],膻中定位:胸骨正中线上平第4~5肋间隙;三阴交定位:后肢内踝尖直上10mm处。刺法:以1寸毫针,斜刺膻中穴,留针15min;直刺双侧三阴交穴,加电,疏密波,强度以肌肉轻微抖动为度,时间持续15min,每天1次,共30d。

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