对照组和siRNAhTERT1组. siRNAhTERT2和3组与siRNAhTERT1组相似. 图中左上象限: AnnexinV/PI双染区; 右下象限为Annexin单染区. PI: 碘化丙啶; Annexin V: 磷脂结合蛋白V.
胞生长的影响,结果显示,三种siRNA都可下调hTERT基因表达,使MCF7和MDAMB453两种乳腺癌细胞株的生长受到抑制. 但不同的siRNA对同一基因的沉默效果存在差异,因此,在靶向基因hTERT的siRNA选择和设计时,我们选择hTERT基因外显子不同区域、不同碱基含量的3对长度为19 bp的siRNA片段,探讨不同靶点RNA干扰效果的差异,转染结果表明,siRNAhTERT1,2和3三个实验组和对照组hTERT基因表达几乎无变化,siRNAhTERT1,2和3三种siRNAhTERT处理后hTERT的mRNA和蛋白表达均明显下调. 同时,采用siRNA转染来源不同的乳腺癌细胞株后,无论是MCF7还是MDAMB453细胞株,经siRNAhTERT1,2和3三种siRNA处理后,细胞增殖均受抑制,48 h后出现不同程度的调亡,这提示siRNAhTERT1,2和3三种siRNA可较好的作用于不同来源的乳腺癌细胞,为RNA干扰药物应用于乳腺癌治疗奠定了基础.
综上所述,本研究利用RNAi技术筛选出3对siRNA,均可特异性下调乳腺癌细胞株hTERT基因的表达;导入MCF7和MDAMB453两种乳腺癌细胞株后,可明显抑制肿瘤细胞的增殖,使部分细胞发生调亡,这为乳腺癌基因治疗的临床研究提供了依据.
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