| 雌二醇鼻腔喷雾剂大鼠体内的药动学研究 |
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．4．1 色谱条件 色谱柱为Kromasil ODS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm, Zirchrom）；流动相为乙腈水（体积比40∶60），流速为1 mL·min-1；荧光的激发波长为267 nm，发射波长为302 nm；检测温度为30 ℃。
2．4．2 内标溶液的配制 精密称取对羟基苯甲酸乙酯50 mg，置50 μL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，得内标储备液。用甲醇稀释为12.5 μg·mL-1的内标溶液。
2．5 血浆样品处理和测定方法
取全血约0.5 mL，于8 000 r·min-1离心10 min，精密量取血浆0.2 μL，置刻度具塞试管中，用微量进样器加内标溶液5 μL，旋涡振荡2 min，再加入5 mL乙醚，旋涡振荡5 min，于3 000 r·min-1离心5 min，吸取上层乙醚，40 ℃用氮气吹干，然后加入200 μL甲醇溶解，每次进样50 μL。以E2和内标峰面积比R＝As／Ai（As为E2峰面积，Ai为内标峰面积）为定量依据，计算样品中E2的含量。
2．6 样品稳定性试验
取大鼠空白血浆200 μL，配制E2低、中、高3个浓度 （浓度分别1.984、99.200和496.000 ng·mL-1）的血浆样品，样品经液液提取处理后，室温（约20 ℃）下放置24 h测定，以考察处理后的E2血浆样品在室温下的稳定性。每一浓度进行3样本分析。3个浓度下血浆样品中E2测定均值与加入值之间的相对误差（RE/%）分别为3.1%，2.1%和5. 3%，表明血浆样品处理后在室温下至少可稳定存放24 h。
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