| 2010生物高考“基因工程”考点解读 |
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一、 真题解析
（2010年江苏省第27题） 下表中列出了几种限制酶识别序列及切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的位点。请回答下列问题：
（1） 一个图1所示的质粒分子经Sma I切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。
（2） 若对图中质粒进行改造，插入Sma I 酶切位点越多，质粒的稳定性越 。
（3） 用图中的质粒和外源ＤＮＡ构建重组质粒，不能使用Sma I切割，原因是。中国论文联盟*编辑。
（4） 与只是用EcoR I 相比较，使用BamH I和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止。
（5） 为了获取重组质粒，可将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入。
（6） 重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了
。
（7） 为了从cDNA 文库中分离获取蔗糖转基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖的能力的大肠杆菌突变体，然后在的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
解析（1） DNA是由脱氧核苷酸通过磷酸二酯键（见下图中标号①）连接成DNA单链，两条DNA单链通过碱基互补配对原则相连形成双链(见下图中标号②），质粒的DNA分子为环状结构，因此没有磷酸基团游离，经过Sma I切割后，环状DNA分子中的磷酸二酯键断裂，因此便形成两个游离的磷酸基团。
（2） Sma I酶切位点多表明CG碱基对含量高，因此DNA 分子的热稳定性高。
（3） 目的基因和抗性基因中都含有Sma I酶切位点，使用该酶会破坏它们的完整性。
（4） 只用EcoR I限制酶对质粒和目的基因同时处理，得到的黏性末端是相同的，即和，如此质粒分子和目的基因的黏性末端可相连外，它们自身的黏性末端也可相连形成环状结构。若用BamH I和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，则会形成不同的黏性末端，因此它们不会发生自身环化。
（5） 切割后的质粒与目的基因片段含有黏性末端，获得重组质粒是要将黏性末端相连，需要用DNA连接酶。
（6） 要检验是否形成重组质粒需要加入标记基因，若是标记基因表达则说明形成了重组质粒，标记基因有多种，其中包括抗性基因。
（7） 要检测蔗糖转基因是否表达，只要看已丧失吸收蔗糖的能力的大肠杆[1] [2] [3] [4] 下一页 |
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