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EMB基因330密码子分子DNA探针设计及荧光检测 |
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| EMB基因330密码子分子DNA探针设计及荧光检测 |
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522 nm。开盖放入比色杯空白调零。以1 mL无菌ddH2O测定做空白对照。标本编号，做荧光定量检测。保存实验数据取出比色杯，清洗。
1.6 临床耐药分离株PCR扩增产物测序
33株耐乙胺丁醇(EMB)结核分枝杆菌PCR扩增产物（扩增按以上方案，不加入TBembB330codonMB），产物由上海生工生物科技有限公司测序。 2 结果
分子DNA探针TBembB330密码子MB二级结构预测见图1。
运用荧光分光光度计观测embB330密码子序列扩增-分子DNA探针杂交结果见图2。
结核杆菌耐乙胺丁醇临床分离株PCR扩增产物测序，发现embB330codon位点突变仅1株：305SRE，为TTC→GTC；其余：605E、942ER、987E、153E、A021E、102E、409ER、075ES、292ER、85E、53E、307E、207E、42RE、553E、64RE、2ER、424SE、605ER、419SE、451ER、04RE、75RE、52SE、A79RE、708E、841ES、325E、A74E、69RE、82RE、54ER未见embB330codon位点突变。突变率为3%。305SRE突变株测序见图3。
3 讨论
EMB是具有广谱抗分支杆菌活性的一线抗结核合成药物，被广泛应用于结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌等引起的结核的治疗，具有比异烟肼更广的抗菌谱。为了提高乙胺丁醇的杀菌作用，研究结核杆菌对乙胺丁醇的耐药机制，建立结核杆菌精确、快速耐药性检测方法、特别是单碱基突变的精确定位，对结核病防控具有重要的现实意义［1］。目前的研究表明结核EMB耐药主要由阿拉伯糖基转移酶的编码基因embB突变引起，emb 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 下一页 |
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