| 褪黑素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达的影响 |
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信号介质介导其它炎症因子而起作用，表现出强的神经毒性。褪黑素(5-甲氧基-N-乙酰色胺,melatonin,MT)主要是由松果体分泌的激素,能直接清除自由基,减轻细胞的过氧化损害[1]。本试验通过观察大白鼠脊髓损伤后腹腔注射褪黑素对iNOS表达的影响，分析褪黑素在脊髓继发性损伤中的可能作用，为临床治疗继发性脊髓损伤提供理论及实验依据，也为进一步实验研究提供资料。
1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂 Olympus光学显微镜图像采集系统显微图像分析系统(日本)，褪黑素购自晶美北京分公司(瑞士Alexis公司生产)，兔抗大鼠iNOS多克隆抗体免疫组化试剂盒、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒为武汉博士德生物工程有限公司提供。
1.2 实验动物与分组 健康成年SD大鼠110只,雌雄各半,体重250～330g。随机分为假损伤组、损伤组和药物治疗组3组。其中损伤组和药物治疗组各50只，分5个时间点（损伤后8小时、24小时、72小时、7天、14天）处死；假损伤组10只，于手术后14天处死。药物治疗组术后立即给予褪黑素每天50mg/kg，腹腔注射，连用7天;而假手术组和损伤组给予等量含5%无水乙醇的生理盐水。
1.3 动物模型的建立 采用改良Allen's撞击法，10%的水合氯醛按300mg/kg体重腹腔麻醉，俯卧位固定，常规碘伏消毒铺巾，以T10棘突为中心行背侧正中纵切约2.5cm,行T9、10椎板切除术，暴露硬脊膜，在硬膜表面垫一弯曲度与脊髓表面一致的塑料垫片,用重10g金属棒从4.0cm高处沿中空玻璃管垂直自由落下撞击脊髓，造成急性脊髓损伤，假手术组只做T9、10椎板切除术，显露硬脊膜，不用重物撞击。造模成功的标志为大鼠的双下肢呈回缩性扑动、尾巴出现痉挛性摆动。造模成功的动物每天给予截瘫护理，每日人工排尿排便3次。
1.4 取材和HE染色 将各组大鼠在各相应时间点麻醉下开胸,经左心室-主动脉插管心脏灌注固定,先用等渗盐水约250mL冲洗至流出澄清液,再用4%多聚甲醛约200mL灌流至动物完全僵硬,完整取出包括损伤段及其上下约1cm脊髓 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] 下一页 |
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