| 褪黑素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达的影响 |
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组织。迅速用4%甲醛液进行固定过夜，脱水，石蜡包埋，4μm连续切片，做HE染色,观察病理改变。
1.5 免疫组织化学染色及图像分析 切片脱蜡水化后,用3%过氧化氢室温孵育 10分钟,灭活内源性过氧化氢酶;5%BSA室温封闭 20分钟;加入1∶80稀释兔抗大鼠iNOS多克隆抗体 4℃过夜;滴加生物素化羊抗兔IgG 37℃ 20分钟;滴加SABC 37℃孵育 20分钟;DAB显色,苏木素复染,封片。以PBS代替一抗作阴性对照。镜下观察阳性细胞胞浆呈棕黄色,每组抽取一张切片，每张切片任选5个高倍视野,应用显微图像分析系统测定iNOS阳性细胞百分率和平均灰度值,取其平均值。
1.6 统计学分析 用SPSS13.0软件包进行统计,各组数据采用x±s表示,阳性细胞百分率和平均灰度值，采用两独立样本均数的t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HE染色 假损伤组表现为正常脊髓组织的特点,显示灰白质交界清楚，神经元丰富，胞体大，核仁明显。损伤组伤后8小时见灰、白质界限不清，有大量红细胞渗出，神经细胞变性；伤后24小时后大量出血、明显水肿、神经细胞变性、神经元核浓聚；伤后72小时部分出血灶融合成小片状，水肿明显，神经元变性，神经元固缩、坏死、溶解，部分出现坏死;伤后7天充血水肿减轻，灰、白质有多个出血灶融合；神经元、胶质细胞变性，部分崩解，神经元数量减少；灰、白质区均有空洞形成，大量小胶质细胞浸润，有炎细胞浸润，毛细血管形成;伤后14天充血水肿消退，灰、白质区均有空洞，神经胶质增生明显，较多结缔组织增生。药物治疗组与损伤组相比，各时间点组织水肿较轻，出血较少，空洞形成较少，神经元细胞较多，脊髓损伤均有不同程度的减轻。见图1、图2。
图1 损伤组24小时（略）
图2 药物治疗组24小时（略）
2.2 免疫组化检测结果 假损伤组未见iNOS蛋白表达。脊髓损伤后,损伤组神经元、神经胶质细胞等中 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] 下一页 |
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