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好, 分泌抗体性能稳定。
2.4 mAb的特性分析及鉴定 1E7和5B7 mAb的免疫球蛋白亚类分别IgG1和IgG2a, 二者轻链均为κ型。经Western blot证实2株抗体均可特异性结合表达的OPN蛋白（图4）。用间接ELISA检测该2株抗体的效价为1∶10 000以上。相加实验测得mAb细胞株1E7和5B7培养上清的相加系数接近于100%, 说明2个mAb可识别OPN的不同抗原表位。
2.5 OPN在正常人子宫内膜的表达 免疫组化显示在子宫内膜腺上皮的增生期和分泌早期, 骨桥蛋白呈弱阳性表达（图5A、 B）, 分泌中期和分泌晚期骨桥蛋白在腺上皮腔面, 皆呈中等强度和强阳性表达（图5C、 D）, 血管内皮细胞呈弱阳性表达, 整个月经周期中子宫内膜间质细胞不表达骨桥蛋白。在同一标本中各腺体及腺细胞染色不均匀, 但阳性细胞数均在50%以上。
图4 OPN mAb的Western blot 鉴定（略）
1: pTriEx1hOPN转化Tuner（DE3）placI后的诱导上清; 2: 纯化的 OPN蛋白.
图5 OPN在正常月经周期子宫内膜中的表达（免疫组化, ×100）（略）
A: 增殖期子宫内膜; B: 分泌早期子宫内膜; C: 分泌中期子宫内膜; D: 分泌晚期子宫内膜.
3 讨论
近年来OPN表达与生殖的关系逐渐受到人们的重视, 但对OPN在子宫内膜中表达的具体作用知之甚少。OPN作为一种细胞外基质蛋白, 通过在细胞－细胞间, 细胞与ECM间的相互作用中起着重要作用, 几乎参与了生殖的全过程: 受精, 着床及胎盘的形成, 并在胎盘和子宫的连接、 信号转导中具有重要作用［5］。OPN表达过量或不足均可能引起疾病, 如不明原因的不孕, 或子宫内膜异位症等。最近有报道称子宫内膜异位证患者的在位内膜及异位内膜均较正常人子宫内膜OPN表达水平高。OPN可能在子宫内膜的侵袭、 转移中起了重要作用, 也可能由于子宫内膜高表达OPN 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] 下一页 |
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