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R5特异配体和RAPA进行同种移植耐受诱导奠定基础。
1 材料和方法
1.1 材料 BALB/c小鼠(H2d), 由山东大学实验动物中心提供; C57BL/6 (H2b, B6)小鼠, 由上海实验动物中心提供。以上小鼠均为雌性, 8～12周龄, 均饲养在恒温(25～27℃)、 恒定湿度(45%～55%)无特殊病原菌(SPF级)环境中。RAPA购自美国Sigma公司, CsA 购自Novartis Pharama公司, RTPCR及PCR试剂盒购自TaKaRa公司, Foxp3、 TLR5引物及GAPDH引物由博尚生物技术服务有限公司合成。副伤寒杆菌鞭毛蛋白flagellin (本室参照文献［5］制备）。
1．2 方法
1．2．1 小鼠同种移植模型制备 参照文献［6］进行。制备全厚度小鼠躯干皮肤移植物并行移植术。脱椎法处死供体小鼠（B6）, 取全厚度躯干部皮肤, 去除皮下脂肪及血管, 剪成1 cm2大小的皮片备用。然后给受体BALB/c小鼠腹腔注射戊巴比妥钠（50 μg/g体质量）行麻醉术, 在小鼠右背部制备移植床, 将供体皮片置于移植床, 包扎固定后逐日观察移植物排斥状况。当移植皮片坏死达50%时, 即为完全排斥。
1．2．2 实验分组及模型的耐受诱导 将移植过皮片的BALB/c小鼠随机分为3组, 每组15只。对照组: 术后腹腔注射生理盐水, 0.2 mL/只, 连续14 d; CsA处理组: 术后注射CsA, 10 mg/(kg·d), 连续14 d; RAPA处理组: 术后腹腔注射RAPA, 1.5 mg/(kg·d), 连续14 d（此时对照组移植皮片全部排斥掉, 故停药）。
1．2．3 TLR5及Foxp3 mRNA的表达 分别于移植后第1、 7、 10、 14、 21天, 取实验组对照组小鼠脾脏, 提取脾细胞, 采用异硫基氢酸胍（TRIzol）一步法提取细胞总RNA, 半定量逆转录聚合酶链反应（RTPCR）对转录产物进行扩增, 以三磷酸甘油醛脱 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] 下一页 |
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