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Rapamycin和cyclosporin A对同种排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响 |
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| Rapamycin和cyclosporin A对同种排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响 |
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氢酶（GAPDH）作为内参对照。1 TAE制备15 g/L的琼脂糖凝胶, 加入浓度为0.5 mg/L的溴化乙啶（EB）染色。取PCR反应产物10 μL与2 μL上样缓冲液混合后点样于凝胶孔电泳, 以相对分子质量（Mr）2 000的Marker做标准判断PCR产物片段大小, 恒压5 V/cm电泳50 min, 然后用凝胶扫描仪在A260波长紫外光下观察并扫描。用FR200UV/WHITE ANALYSIS及Photo Impact SE系统对电泳结果作图像分析。实验结果以检测条带与GAPDH条带的总灰度值的比值作为待测目的片段的相对值。
1．2．4 flagellin联合RAPA、 CsA体外处理对TLR5的影响 通过小鼠T淋巴细胞纯化柱（Mouse T Cell Enrichment Columns）纯化BALB/c小鼠脾脏T细胞, 106/孔接种于24孔培养板上; 加入B6小鼠可溶性同种抗原［6］, 实验分6组: 对照组（不加任何药物处理）、 flagellin组（100 μg/L）、 RAPA（15 mg/L）组, CsA组（15 mg/L）, flagellin（100 μg/L）+RAPA（15 mg/L）组、 flagellin（100 μg/L）+ CsA组（15 mg/L）; 每组3个复孔, 37℃、 50 mL/L CO2培养箱中培养6 h后收集细胞, RTPCR检测TLR5表达量, 用FR200UV/WHITE ANALYSIS及Photo Impact SE系统对电泳结果作图像分析, 以检测条带与GAPDH条带的总灰度值的比值作为待测目的片段的相对值。
1．2．5 统计学分析 计量资料以x±s表示, 采用SPSS12.0统计软件进行数据分析, 进行t检验和方差分析, P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2．1 RAPA及CsA对同种移植皮片存活时间的影响 与对照组（13.2±1.5 d）相比, 雷帕霉素组（22.8±2.1 d）和CsA组(22.0±1.9 d)移植皮 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] 下一页 |
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