| 基于发光金纳米粒子荧光增强法测定溶菌酶 |
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Ps已被用于溶液中 Hg2＋\和Ni2＋\的测定, 以及细胞成像分析\。本研究将GNPs应用于TX-100及其临界胶束浓度的测定\。
本研究参照文献\合成了牛血清蛋白（BSA）修饰的GNPs，并考察了它们与溶菌酶及其它常见蛋白质的相互作用。结果表明, 随着溶菌酶加入浓度的增加，GNPs的荧光明显增强，而其它低等电点的蛋白质对GNPs的荧光影响很小，据此建立测定溶菌酶的荧光方法，并用于鸡蛋清样品 和含蛋白质合成样品中溶菌酶含量的测定，结果令人满意。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
F-4500荧光分光光度计、U-3010紫外-可见分光光度计 （日本 Hitachi公司）; JEOL-2010高分辨电镜 （HRTEM, 日本电子株式会社）； TGL-16C型高速离心机 （上海安亭科学仪器厂）; pH酸度计 （杭州东星仪器设备厂）; 85-1型磁力搅拌器 （江苏金坛正基仪器有限公司）。牛血清白蛋白 （BSA，上海生物工程有限公司）; HAuCl4•4H2O （Sigma-Aldrich公司）; 溶菌酶 （Lysozyme Chloride，上海迈瑞尔化学技术有限公司）。0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）； 其它试剂均为分析纯。水为二次蒸馏水。
2.2 实验方法
2.2.1 GNPs的制备\ 将0.125 mL 1% HAuCl4•4H2O （m/V）稀释至20 mL，加入 134 mg BSA，剧烈搅拌 2 h，加入30.6 mg NaBH4， 继续反应 24 h，高速 （11000 r/min） 离心除去颗粒较大的粒子，保留淡黄色的溶液。
2.2.2 样品处理与检测 在一系列 10 mL具塞试管中分别加入0.4 mL GNPs溶液，0.5 mL 0.01 mol/L PBS缓冲液，然后加入不同量的标准试剂溶液或样品溶液，稀释到5 mL，常温下放置10 min后进行荧光测定。测定在室温 （20 ℃）下进行，采用10 mm石英液池，激发波长为 320 nm，激发和发射狭缝宽度为10 nm，光电倍增管的负高压为700 V。
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