| 基于发光金纳米粒子荧光增强法测定溶菌酶 |
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实验用鸡蛋样品购于芜湖当地市场，将蛋清与蛋黄分开，用PBS缓冲液（pH 7.0）将蛋清稀释10倍。取适量上述样品至GNPs溶液中，反应10 min后进行荧光测定。
3 结果与讨论
3.1 发光金纳米粒子的表征
由GNPs的透射电镜图（图1）可见，合成的GNPs约5.1 nm，较均一。每个发光金纳米粒子约包含100个小的金纳米粒子\。 图1 发光金纳米粒子的透射电镜图
Fig．1 TEM image of luminescent gold nanoparticles （GNPs）
合成出的金纳米粒子的荧光光谱见图2。在320 nm紫外光激发时，在410 nm处有一半峰宽大约为70 nm的荧光发射峰，该峰的产生可能与金5d10带和6（sp）1导带之间的电子跃迁有关\。图2还表明，在290 nm处有个很尖锐的紫外吸收峰，与文献\一致。以硫酸奎宁为标准，测得此发光金纳米粒子的荧光量子产率为0.053，证明制备的发光金纳米粒子具有较高的 荧光量子产率\。
3.2 发光金纳米与溶菌酶之间的作用
溶菌酶是高等电点的蛋白质，pI＝11.2，而GNPs表面的BSA等电点为4.7\，在pH 7.0的中性溶液中，GNPs和溶菌酶之间应该存在较强的静电作用。如图3所示，随着溶菌酶浓度的增加，GNPs的荧光强度逐渐增加。此现象可能是溶菌酶 在GNPs表面因静电作用形成了保护层，钝化了GNPs的表面，从而使得GNPs的荧光逐渐增强。在向GNPs中加入其它一些低等电点的蛋白质 时，GNPs的荧光基本不变；按照文献\合成的表面带正电荷的发光金，在相同条件下也未与溶菌酶之间发生明显的相互作用而出现增敏现象。
图2 BSA修饰的发光金纳米粒子的紫外可见吸收光谱（a）和荧光光谱（b）
Fig．2 UV-vis absorption spectra （a） and fluorescence spectra （b） of BSA-modified gold nanoparticles
图3 GNPs在不同浓度溶菌酶存在下的荧光光谱图
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