| 基于发光金纳米粒子荧光增强法测定溶菌酶 |
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强度随着其浓度的增加而增大。但GNPs浓度过大（＞5.0×10－5 mol/L，依据BSA浓度计算\）时，会出现自猝灭现象\，荧光强度反而降低。控制较低的GNPs的浓度，能降低荧光本底，对提高测定灵敏 度有利。但过低的GNPs浓度，会导致发光不稳定，也减小了测定溶菌酶的线性范围。本实验GNPs浓度选择4.0×10－6 mol/L。
3.3.2 酸度与介质的影响 图6给出在4.0×10－6 mol/L溶菌酶存在和不存在的条件下，pH值对发光金纳米粒子荧光强度的影响。 图6 在溶菌酶存在 （F） 和不存在 （F0）条件下，pH值对发光金粒子荧光强度的影响
Fig．6 Effect of pH on fluorescence intensity of GNPs in the presence （F） and absence （F0） of lysozyme
GNPs和溶菌酶浓度均为4.0×10－6 mol/L（Both the concentration of lysozyme and GNPs were 4.0×10－6 mol/L）。发光金粒子本身在不同pH值荧光强度呈现一定的波动，在pH＞11时强度较大，这与文献\一致，可能是不同pH值时发光金的表面态不同所 致。最大的荧光增强出现在pH 7.0附近，在此酸度下，溶菌酶带有较高的正电荷。而Zeta电势实验表明，此条件下发光金粒子表面带有较高的负电荷（数据未列出），二者间强的静电相互 作用可能有效地导致了发光金表面钝化，并增强其荧光发射。因此，本实验选择pH 7.0的PBS缓冲溶液控制反应的酸度。
3.3.3 反应时间的影响
考察了反应时间对溶菌酶测定的影响。结果表明，试剂混合后， 荧光逐渐增强； 反应10 min后，荧光强度达到最大,并在随后的20 min内基本保持稳定。本实验选择反应10 min后进行荧光测定。
3.4 干扰实验
混合体系中发光金的浓度4.0×10－6 mol/L，溶菌酶的浓度为6×10－7 m上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] ... 下一页 >> |
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