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免疫干预实验性自身免疫性重症肌无力小鼠的B细胞活化机制           
免疫干预实验性自身免疫性重症肌无力小鼠的B细胞活化机制
小鼠Lyn抗体、 兔抗小鼠PLCγ2抗体和HRPpTyr小鼠单克隆抗体(mAb)购自加拿大SantaCruz公司。

  1.2  实验动物处理与分组  34只近交系无特定病原体(SPF)级6~8周健康雄性C57BL/6J小鼠,  质量20~24 g; 15只SPF级4~6周健康雄性C57BL/6J小鼠,  质量18~22 g,  由中南大学实验动物中心从上海斯莱克斯实验动物有限公司购入。应用SPSS13.0随机数字表,  将34只6~8周C57BL/6J小鼠分为3组: 模型组(A组): 实验0 d、 30 d、 60 d连续3次以TAChR抗原乳剂200 μL(20 μg TAChR、 100 μL CFA、 100 μL PBS)皮下注射小鼠的双肩及后足垫,  每个部位50 μL免疫动物,  诱导EAMG发作; 干预组(B组): 实验0 d、 30 d、 60 d连续3次以TAChR抗原乳剂免疫动物,  3 d、 33 d、 63 d分别以负载Tα146~162(50 mg/L)的iMDCs干预; 对照组(C组): 实验0 d、 30 d、 60 d连续3次予CFA+PBS皮下注射,  3 d、 33 d、 63 d予1 mL PBS皮下注射。按Berman等[3]评分标准做EAMG严重性的临床评估,  评分1分以上者进行发病率的计算。15只4~6周C57BL/6J小鼠用途为取DCs,  不参与分组。

  1.3  DC的培养  参照胡珏等[2]方法提取骨髓并诱导DC分化。DC表型分析: 收集培养的DC,  用PBS重新将细胞制成悬浮液并调整细胞密度为1×109/L,  台盼蓝染色细胞活力>95%,  加入试管,  分别加入荧光抗体标记抗体CD11C、 CD40、 CD86和MHCII,  4℃孵育30 min,  PBS洗涤2次,  以荧光标记的同型Ig作对照,  流式细胞仪(FACS caliber,  BD公司)检测,  CellQuest软件分析。

  

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