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性［1, 2］。已证实IL13是许多II类细胞因子决定的病理过程的关键诱导物, 与多种纤维化疾病的发病机制有关［3, 4］, 我们前期实验结果显示细胞因子IL13可通过JAK（细胞内一组酪氨酸蛋白激酶）STAT6（信息传导和转录激活因子）信号转导通路促进成纤维细胞胶原蛋白的合成［5, 6］, 本实验进一步通过体外培养成纤维细胞, 观察A77 1726对成纤维细胞增殖的影响, 以及A77 1726和IL13共同作用成纤维细胞, 观察I型胶原α1基因表达及对I型胶原蛋白合成的变化, 以探讨A77 1726是否通过抑制JAK/STAT6信号转导通路而阻断纤维化的部分机制。
1 材料和方法
1.1 材料 成纤维细胞株3T3细胞, 常规培养在含150 mL/L胎牛血清、 1×105 U/L的青、 链霉素的DMEM培养液中, 置于37℃、 含50 mL/L的CO2孵箱中培养, 实验前, 实验组和对照组细胞均用无血清DMEM培养12～16 h, 实验组加入A77 1726（50 μmol/L）和IL13（100 μg/L）, 实验对照组加IL13（100 μg/L）（浓度已做过优化实验, 此浓度最佳）。IL13、 Peprotech公司, A77 1726为美国欣凯公司上海代表处惠赠, 羊抗I型胶原蛋白抗体、 羊抗βactin抗体、 Santa Ｃruz公司, HRP兔抗羊IgG（II抗）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。Western blot Luminol Reagent(sc2048): Santa Cruz。COL1A1特异性引物, TaKaRa公司(大连宝生物), F: 5′ACAgAggCATAAAgggTCA3′; R: 5′CAAggTCACggTCACgAA3′。SV total RNA isolation system（Promega）, RTPCR kit（TaKaRa公司）, 羟脯氨酸试验检测盒购自南京建成生物工程研究所。
1.2 方法
1.2.1 MTT法检测A77 1726对成纤维细胞的增殖影响 将细胞以2.5×1 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] 下一页 |
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