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16 h后, 实验分组同1.2.2, 收集细胞, 随后各组用RIPA Buffer将细胞充分裂解, BioRad Dye Reagent（BioRad）进行蛋白定量。调整样品中蛋白质含量, 均以20 μg蛋白量上样进行70 g/L SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳, 硝酸纤维膜转印。50 g/L脱脂奶粉4℃封闭, TBS洗涤, 经I型胶原蛋白第一抗体和第二抗体分别孵育后, ECL试剂显像。再利用清除缓冲液清除硝纤膜上已结合的一抗和二抗, 重新经βactin一抗、 二抗孵育后, 再次显像, 作为内部参照。对结果利用凝胶定量软件Quantity One(BioRad)进行光密度分析。
1.2.5 统计学分析 各实验重复3次, 计量资料以x±s表示, 以t检验对实验组和对照组进行差异显著性检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 A77 1726抑制成纤维细胞生长 不同浓度A77 1726作用成纤维细胞, MTT法检测到A77 1726可抑制成纤维细胞增殖, 当A77 1726浓度在25 μmol/L至100 μmol/L时, 细胞抑制率明显上升。为此, 取50 μmol/L作为A77 1726对成纤维细胞作用的浓度(表1)。 表1 不同浓度A77 1726对成纤维细胞生长的影响（略）
Tab 1 The effect of A77 1726 on inhibition rate in fibroblasts
aP<0.05, bP<0.01 vs control.
2 2 A77 1726阻断IL13促成纤维细胞分泌胶原 羟脯氨酸是胶原分解代谢的产物, 机体内的羟脯氨酸主要存在胶原中, 因此, 羟脯氨酸是反映胶原含量的重要指标。IL13和A77 1726同时作用成纤维细胞24 h后分泌的总胶原含量与单独IL13作用24 h组比较可见减弱, 48 h组可见明显减弱（P&l 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] 下一页 |
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