| 针刺对抑郁大鼠海马神经因子表达的影响 |
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NF、NGF免疫组织化学染色载玻片经防脱片剂PolyLysine处理，体积分数3%H2O2室温作用10 min以灭活内源性酶，蒸馏水洗3次。热修复抗原：将切片浸入001mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH 60), 微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10 min，反复1～2次。冷却后PBS(pH 72～76)洗涤2次，加50 mg/L的牛血清白蛋白(BSA)封闭液，室温20 min。甩去多余液体，不洗，滴加1∶100稀释的一抗(抗BDNF、NGF)，37℃放置1 h。PBS洗涤2 min×3次，滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃、20 min。PBS洗涤2min×3次，滴加链霉亲和素—生物素—过氧化物酶连结法(SABC)试剂，37℃、20 min。PBS洗涤5 min×4次，使用DAB显色试剂显色。取1 mL蒸馏水，加入试剂盒中ABC试剂各1滴，混匀后加至切片。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5～30 min之间。蒸馏水洗涤，苏木素轻度复染。脱水，透明，封片，显微镜观察。每组各取1张切片贴在载玻片上，通过比较吸光度(D)半定量分析BDNF和NGF的表达量。每张随机取2个视野，在10×40光镜下用图像分析仪进行分析。
16统计学方法采用SPSS 120软件分析数据，用单因素方差分析：方差齐时采用LSD法(最小显著差异法);方差不齐时采用Dunnett T3法。
2结果
正常组大鼠海马结构中，BDNF阳性细胞表达很强，广泛分布于海马的锥体细胞和齿状回的颗粒细胞层，细胞排列密集，着色深，有的有较长的突起。与正常组比较，模型组BDNF阳性细胞数量明显减少，且多数细胞呈空泡状，胞浆着色较浅。针刺组、西药组BDNF阳性细胞数显著增加(与模型组比较，P<005)，但两组间比较，差异无显著性意义(P>005)。结果见表1、图1(见彩图页第615页)。
正常组大鼠海马神经元中可见较多的NGF免疫反应阳性颗粒，呈浅棕色。与正常组比较，模型组大鼠海马神经元NGF 阳性细胞数显著减少(P<001)，着色浅淡。针刺组、西药组与模型组比较，NGF 阳性细胞数显著增加(P<005)，但两组间比较，差异无显著性意义(P>005)。结果见 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] 下一页 |
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