| 针刺对抑郁大鼠海马神经因子表达的影响 |
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在20℃～25℃，湿度60%～80%。实验在广州中医药大学动物实验中心进行(合格证编号：0007047)。
12试剂与仪器BDNF、NGF免疫组化试剂盒购自中山生物试剂有限公司广州分公司。33’二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)显色剂，兔抗NGF和BDNF多克隆抗体：一抗(工作浓度为1∶100)、二抗、三抗，40 g/L多聚甲醛，磷酸盐缓冲液(PBS)均购自武汉博士德生物有限公司。CX21BIMSET生物显微镜(OLYMPUS公司生产)，图像分析仪(北京航空航天大学24版本)。
13动物模型的复制按照参考文献方法[3]进行抑郁症模型大鼠的复制。模型组、针刺组、西药组每笼饲养1只，各组分别接受21 d各种不同的应激刺激，包括断水24 h;断食24 h;夹尾1 min;4℃冰水游泳5 min;摇晃：1次/s，5 min;昼夜颠倒;电击足底，电压50 mV，每5 s刺激1次，间歇5 s，共刺激10次。每天随机选择1种刺激，每种刺激平均使用3次，共21 d。
14治疗方法给予大鼠各种不可预知的应激刺激同时，西药组按照2 mg·kg-1·d-1剂量给予盐酸氟西汀(美国礼来公司)，将药物溶于生理盐水中灌胃，每天1次。针刺组每天应激刺激前1 h进行治疗，根据《实验针灸学》[4]大鼠穴位定位方法取穴，选取百会、心俞、肝俞。穴位常规消毒，选用华佗牌025 mm×13 mm针灸针进行针刺。百会向尾部斜刺，进针深度约为2 mm，心俞、肝俞(左右两侧穴位交替使用，每次取单侧)斜刺5 mm，每穴均匀捻转刺激30 s，留针15 min。每天1次，共21次。
15检测指标和方法
151取材方法各组大鼠在治疗21 d结束后，全部断头取脑，剥离全脑，于冰浴下迅速分离出海马，40 g/L多聚甲醛固定6 h，再依次浸入200、300 g/L的蔗糖PBS(pH 72)中，直至组织块下降到底部，恒冷冰冻切片机连续冠状切片，取海马与齿状回互包平面，片厚40 μm，直接置于01 mmol/L PBS液中，4℃冰箱保存。
152BDNF、NGF免疫组织化学染色载玻片经防脱片剂PolyLysine处理，体积分数3%H2O2室温作用10 min以灭活内源性酶，蒸馏水洗3次 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] 下一页 |
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