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℃ 30 s, 72℃ 4 min, 30个循环, 72℃ 10 min。取5 μL扩增产物以10 g/L琼脂糖凝胶电泳分析, 鉴定插入的 cDNA 片段大小。
2 结果
2.1 总RNA的提取和mRNA的分离纯化 总RNA经紫外分光光度计测A260/A280为1.87, 经MOPS甲醛变性凝胶电泳观察, 28 S和18 S条带清晰, 亮度比例恰当, 说明总 RNA 未被降解(图1)。mRNA紫外分光光度计测A260/A280为2.02, 表明mRNA纯度高, 符合构建文库要求。
图1 人大肠癌细胞系CCL187和CX1细胞总RNA（略）
Fig 1 Electrophoresis result of colorectal cancer cell lines CCL187 and CX1 total RNA
M: DL 2 000 marker; 1: Total RNA.
2.2 cDNA第 1、 2 链的合成及鉴定 合成的 cDNA第1、 2链琼脂糖凝胶电泳结果表明, cDNA的第 1 链片段集中区在1.0～2.0 kb之间; 第2链与第1链相似 , 为连续拖影smear, 大小分布均匀, 符合实验要求（图2）。
将所合成的cDNA通过SepharoseCL2B柱层析分离, 分步收集后, 分别合并第 6、 7、 8管和第9、 10、 11管, 并取小量体积电泳 (图3), 结果显示, 在所收集的第6、 7、 8管中的cDNA大小在500 bp以上, 符合 cDNA文库构建的要求。
图2 cDNA第1链和第2链合成情况的电泳分析（略）
Fig 2 Electrophoresis analysis of firststrand and secondstrand of cDNA 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] 下一页 |
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