人大肠癌抗原基因 cDNA噬菌体表达文库的构建和鉴定


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人大肠癌抗原基因 cDNA噬菌体表达文库的构建和鉴定

　　M: DL 2 000 marker; 1: Firststrand cDNA; 2: Secondstrand cDNA.

　　图3 过柱分离所收集cDNA 样品的电泳分析（略）

　　Fig 3 Electrophoresis analysis of collected cDNA samples after column chromatograph

　　M: DL 2 000 marker; 1: Collected cDNA fractions (6-8 tubes); 2: Collected cDNA fractions (9-11 tubes).

　　2.3 cDNA表达文库的鉴定经测定原始文库容量为2.3 ×109 pfu/L。在涂有 Xgal、 IPTG 的平板上进行蓝/白斑筛选, 测定文库重组率约为97%。原始文库经扩增后, 测定滴度为1.2×1012 pfu/L。

　　2.4 cDNA表达文库插入片段的PCR分析随机挑取8个克隆经PCR鉴定cDNA插入片段大小。10 g/L琼脂糖电泳结果显示, 插入片段长度平均达1.0 kb 以上 (图4）。

　　图4 PCR扩增cDNA表达文库插入片段（略）

　　Fig 4 PCR amplification of inserted fragments of cDNA library

　　M: DL 2 000 marker; 1-8: The PCR products of the clones picked randomly from the cDNA library.

　　3 讨论

　　cDNA文库的质量主要反映在文库的代表性和